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QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可對多種RNA模板進(jìn)行簡(jiǎn)單、靈敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉錄和PCR反應特別設計的酶。du特組合的Omniscript和Sensiscrip逆轉錄酶對RNA模板有高度親和性，確保RNA逆轉錄的靈敏度達到1 pg到2 µg。逆轉錄完成后，升溫至95°C，15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase同時(shí)使逆轉錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴增產(chǎn)物的生成，并減少背景的影響，確保RT-PCR的高靈敏度和可重復性（參見(jiàn)Highly specific RT-PCR using low amounts of template 和 Efficient detection of viral RNA）。

退火溫度范圍寬

引物的退火溫度取決于堿基對的組成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應的離子環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用該緩沖液可在很寬的溫度范圍內增加特異性PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量（參見(jiàn)Increased specific primer annealing）。其原理是破壞非特異性結合的引物對，提供更加可靠的反應環(huán)境，減少繁瑣的溫度優(yōu)化過(guò)程。相反，如使用僅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR退火溫度的范圍較窄，可靠性較差，參見(jiàn)Influence of annealing temperature on specificity。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專(zhuān)為提高逆轉錄和PCR擴增的效率而設計。該緩沖液含有新型輔助劑，可防止逆轉錄酶對PCR擴增的抑制，而這是一步式RT-PCR中常見(jiàn)的問(wèn)題。該緩沖液確保在較大的溫度范圍和Mg²⁺濃度范圍內，引物與模板特異性結合，可對多種RNA模板進(jìn)行高效的RT-PCR擴增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸熔解行為的新型輔助劑。Q-Solution可促進(jìn)高GC含量或含較多二級結構的模板的逆轉錄和擴增（參見(jiàn)RT-PCR of GC-rich template）。 使用Q-Solution可簡(jiǎn)化復雜模板RT-PCR的優(yōu)化過(guò)程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進(jìn)行快速、簡(jiǎn)便的RT-PCR，用于多種靈敏的應用（見(jiàn)表）。

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、簡(jiǎn)單的進(jìn)行RT-PCR反應體系構建。無(wú)論是何種應用，即無(wú)論是病毒檢測、分子診斷研究還是基因表達，您只需將所有試劑在一個(gè)離心管中混合即可開(kāi)始PCR擴增（參見(jiàn)OneStep RT-PCR procedure）。反應混合液含有逆轉錄和PCR反應所需的所有試劑，無(wú)需添加其他試劑即可開(kāi)始反應（參見(jiàn)下表）。

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit適用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒檢測

• 單細胞RT-PCR

• 基因表達分析