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Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒

du te的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因組DNA去除方案和內質(zhì)控的一種快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染，同時(shí)內質(zhì)控RNA可以監測逆轉錄和擴增反應是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆轉錄反應所需的一切。合成的cDNA適用于進(jìn)行real-time PCR, 可以對任何mRNA區域的靶向序列進(jìn)行可靠定量。

Performance

du te的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。去除基因組DNA污染對于獲得精確基因表達結果非常關(guān)鍵，并且在不能設計出RNA特異性的引物時(shí)，例如當分析單外顯子基因時(shí)，也需要去除基因組DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以節省時(shí)間和成本，因為不需要在反應中或反應后單獨進(jìn)行DNase消化。 

全新開(kāi)發(fā)的內質(zhì)控是一種成分明確的轉錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉錄為cDNA，可直接反應儀器或相應試劑是否正常，實(shí)驗構建的體系是否存在錯誤，以及反應體系中是否存在抑制劑。預期的Cq (CT)范圍可以用來(lái)確認逆轉錄和PCR擴增的成功與否，以及實(shí)驗結果的可重復性。 

Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA親和性確保您可從任何RNA模板獲得高產(chǎn)率cDNA。即便是難擴增模板，如高GC含量或含有復雜二級結構的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉錄反應。Reverse Transcription Mix包含一種特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機引物混合物，可以從包括5’區域在內的RNA轉錄本的任何位置進(jìn)行cDNA合成。無(wú)論擴增靶標位于轉錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高產(chǎn)量cDNA。同時(shí)對于低表達豐度的基因, 該試劑盒還可提供更高靈敏度的檢測能力。 

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在較寬的起始量范圍內提供精確的結果，在標準的實(shí)驗方案中起始RNA量可zui高達5 µg，在特殊要求的實(shí)驗條件下該用量可以加倍。 

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA親和性，可以在極寬的模板量范圍內（10 pg– 5 μg）合成cDNA（見(jiàn)圖：5 µg–10 pg起始 RNA的精確定量）。無(wú)論擴增靶標位于轉錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒可提供用于real-time PCR分析的高產(chǎn)量cDNA。即使難擴增模板，比如高GC含量或含有復雜二級結構的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉錄反應。QuantiNova RT Buffer經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可兼容real-time PCR緩沖液。

為獲得精確的real-time RT-PCR基因表達檢測結果，非常重要的一點(diǎn)是保證只有cDNA被擴增和檢測到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因組DNA干擾(見(jiàn)圖：有效去除gDNA污染保證準確定量轉錄本）。使用gDNA Removal Mix節省了時(shí)間和成本，因為不需要在反應中或反應后單獨進(jìn)行DNase消化。同時(shí)，也無(wú)需設計RNA特異性引物或探針。

檢測cDNA合成的差異度可以顯示實(shí)驗結果的可重復性。全新開(kāi)發(fā)的內質(zhì)控是一種成分明確的轉錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉錄為cDNA，可直接反應儀器或相應試劑是否正常，實(shí)驗構建的體系是否存在錯誤，以及反應體系中是否存在抑制劑。因為內質(zhì)控和真實(shí)轉錄本的性質(zhì)相似，所以它可以在接下來(lái)的qPCR實(shí)驗中用來(lái)確認逆轉錄和PCR擴增的成功與否（見(jiàn)圖：內質(zhì)控可靠檢測是否存在抑制劑）。

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit進(jìn)行基因組DNA去除和cDNA合成僅需20分鐘。該試劑盒包含進(jìn)行快速cDNA合成的所需的一切成分。

純化后的RNA和gDNA Removal Mix簡(jiǎn)單孵育即可除去基因組DNA污染。和其它方法不同的是，RNA樣本接下來(lái)可直接與Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的預混液混合，進(jìn)行逆轉錄反應。使用QuantiNova Reverse Transcriptase，逆轉錄反應可以在低溫下進(jìn)行，包括對于復雜的二級結構模板。反應在42°C的溫度條件下進(jìn)行保證了RNA的完整性，并隨后在85°C進(jìn)行酶滅活以終止反應。不需要進(jìn)行額外的RNA變性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可從任何起始材料（包括激光微切割樣本或組織活檢樣本）獲得高效及高靈敏度real-time RT-PCR結果。