ELISA試劑盒檢測中用到的樣品處理方法
瀏覽次數：6294發(fā)布日期：2013-08-21
hbzhan內容導讀：試劑盒使用時(shí)一定要根據自己的實(shí)驗需要購買(mǎi)提取試劑盒，如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會(huì )影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析、分子克隆等后續實(shí)驗的結果。
1.細胞培養物上清：
細胞培養物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
2.血清：
標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后與1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3.血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃，1000g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
4.尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，既可用于檢測，要長(cháng)期保存尿樣，可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長(cháng)期保存。
5.組織勻漿：
將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜，再經(jīng)過(guò)二次反復凍融破膜，5000g,4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。
當前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取
試劑盒，但其售價(jià)較高，單次實(shí)驗費用話(huà)費太大，對精度要求不高的實(shí)驗沒(méi)有必要購買(mǎi)，當然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(cháng)的問(wèn)題（如果碰上國內無(wú)貨的時(shí)候，要從國外發(fā)貨，會(huì )等很長(cháng)一段時(shí)間）。普通的提取實(shí)驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現貨，如天根（目前國內生產(chǎn)的試劑盒中銷(xiāo)售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性?xún)r(jià)比還可以。
當然，就RNA的提取而言，不一定
試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復雜一些。
