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除了個(gè)別在PAGE膠上利用熒光或者酶活性直接做類(lèi)似Western反應的“前衛”方法，印跡法的常規主流，無(wú)論是Southern、Northern還是Western Blot，都需要將電泳結果轉印到膜上固定，再進(jìn)行顯色顯影反應。對于各種Blot來(lái)說(shuō)，作為承載實(shí)驗結果的載體，包括各類(lèi)斑點(diǎn)雜交或者克隆轉印，膜的選擇就顯得很重要。

    德國老牌的廠(chǎng)家Schleicher & Schuell是世界*個(gè)生產(chǎn)硝酸纖維素膜的廠(chǎng)家，其產(chǎn)品標準即為同類(lèi)產(chǎn)品的行業(yè)標準，產(chǎn)品質(zhì)量毋庸置疑，去年被對手之一的Whatman收購而成為Whatman旗下產(chǎn)品。不過(guò)由于這個(gè)牌子的產(chǎn)品品種頗多，初次選擇時(shí)不免讓人眼花繚亂，上海力敏小編在這里特別介紹一下，便于大家選擇。

PVDF膜

    Westran S：很高的蛋白質(zhì)結合效率和載量，即使很劇烈的反復洗滌條件也不影響目標蛋白結合。0.2μm小孔徑，防蛋白質(zhì)滲漏。zui重要的是，PVDF膜化學(xué)性質(zhì)穩定，可以兼容測序----將蛋白條帶剪下可以直接去N端測序。如果需要做蛋白質(zhì)測序，PVDF是*選擇。

    Westran Clear Signal：和小S的區別是孔徑，這個(gè)是0.45μm，其他特性一樣，專(zhuān)為蛋白質(zhì)Western用的。由于孔徑大，轉移速度也比較快，截留的背景更少，信號就更清晰。CS可以兼容常規的蛋白燃料，比如麗春紅，氨基黑，靠馬斯亮藍染色。

    PVDF膜用前需要“飄在”甲醇液面浸潤（通風(fēng)櫥操作），然后才能進(jìn)行下一步。轉移方法適用于半干轉或者電轉，其他不適合。而固定的方法主要采用干燥固定。顯色，包括化學(xué)發(fā)光法和同位素，化學(xué)顯色法，都適合PVDF膜。

硝酸纖維素膜：
    Protran：純的硝酸纖維素膜。在所有膜中，Protran膜的封閉zui簡(jiǎn)單容易，從而可有效阻斷非特異結合，降低背景，無(wú)需嚴謹清洗即可得到良好的信噪比；廣泛適用于同位素、化學(xué)發(fā)光法、顯色法和熒光法等不同的標記顯色方法，適用于包括Southern，Northern，Western Blot在內的多種實(shí)驗。對于基于HRP的化學(xué)發(fā)光法印跡反應，效果尤佳。不過(guò)，由于是純硝酸纖維素膜，比較脆，操作上要特別注意。Protran孔徑分為0.45μm；0.2μm；0.1μm這3種。0.45μm膜通常適用于分子量大于20KD的蛋白分子和300bp以上大小的核酸；而0.2μm膜則由于密度大孔徑小能有效減少“滲漏”，更適用于分子量小于20KD的蛋白質(zhì)分子，包括300bp以下的短鏈DNA或者寡核苷酸。而0.1μm膜則是用來(lái)對付7KD以下的蛋白質(zhì)小家伙們的。如果你的實(shí)驗中的小分子蛋白質(zhì)Western Blot老做不好（比如EGF），大概有可能就是膜的孔徑不夠小，漏掉拉（當然電泳Buffer不用甘氨酸也是竅門(mén)之一）。硝酸纖維素膜不需要甲醇預先浸潤，用前直接鋪在在水面滲透潤濕后就可以使用。Protran的另外一個(gè)小小優(yōu)點(diǎn)是非常穩定，5年前保存Western Blot的實(shí)驗結果在歷時(shí)5年后再次做顯色反應，依然能正確顯色。雖說(shuō)需要重復用到5年前結果的，好像很少見(jiàn)，但能說(shuō)明其性質(zhì)穩定，可保存蛋白質(zhì)。

    在操作上，除了小心之外，Protran硝酸纖維素膜適用于常規電轉、半干轉、真空轉、毛細轉移，但不適合用堿法。固定方法，如果樣本是核酸，可以用紫外交聯(lián)或者80度烘干固定，蛋白質(zhì)則只需要干燥固定即可。Protran適用于各種通用的顯色方法如化學(xué)顯色，化學(xué)發(fā)光，同位素和熒光法。

    Optitran：夾心的硝酸纖維素膜，中間的聚酯基質(zhì)兩面均勻覆蓋硝酸纖維素，使得該種膜具有硝酸纖維素膜的所有優(yōu)點(diǎn)同時(shí)兼具強韌性，特別適合需要反復操作的實(shí)驗，比如需要多次重復標記雜交和重復洗脫的實(shí)驗----有時(shí)候對同一個(gè)電泳結果需要Western檢測多個(gè)目標蛋白，在檢測*個(gè)目標蛋白后，可用酸洗（如0.2MGlycine/0.5MNaCl,pH2.8）2-5min，Tris中和，從而洗脫*個(gè)目標蛋白抗體，再進(jìn)行第二個(gè)目標抗體的檢測，Optitran的強韌的高耐受性正好適合這類(lèi)重復操作的要求。Optitran膜0.45μm和0.2μm兩種孔徑規格提供，除了單位面積zui大載量相對Protran會(huì )小一些，其他選擇和使用和Protran都是一樣的。Optitran由于帶有聚酯，通常不推薦用熒光檢測。

尼龍膜
  Nytran SuPerCharge：帶高正電荷的尼龍膜。尼龍膜柔軟，強韌，耐折疊，可耐受強度較高的機械操作，這一點(diǎn)上遠勝于硝酸纖維素膜，并因而廣泛用于膜芯片，Macroarray，或者預制核酸雜交膜上。通常核酸分子在電泳條件下是帶負電，尼龍膜上電荷越高，吸附帶負電的核酸分子的能力越強，不過(guò)蛋白質(zhì)荷電特性與核酸不同，尼龍膜更常見(jiàn)用于Southern或者Northern。Nytran SuPerCharge經(jīng)過(guò)特殊處理，均勻附著(zhù)在中間介質(zhì)兩面，表面孔徑均一，電荷量是常規帶正電核酸膜的3倍，對核酸的吸附更強，更重要的是經(jīng)過(guò)特殊處理，克服以往帶電尼龍膜背景高的弱點(diǎn)，能得到良好的信噪比。

    尼龍膜適用于各種轉移方法，如電轉，半干轉，毛細管，堿法等，固定方法是紫外交聯(lián)。不過(guò)就不太適合化學(xué)顯色和熒光檢測。因為尼龍本身有熒光，會(huì )干擾結果；而化學(xué)顯色劑的微小顆粒容易附著(zhù)而產(chǎn)生斑點(diǎn)背景。

    Nytran同樣分0.45μm和0.2μm孔徑，分別適合300bp以上或者以下的核酸片段。選擇的標準是看你的核酸大小。

    Nytran N是常規帶正等電荷的尼龍膜。除了荷電小其他特性和差不多，如果你不想要高電荷，這個(gè)就是一選擇。