低于血清、腹水和組織培養上清的澄清,離心和過(guò)濾是基本的實(shí)驗室技術(shù),這些技術(shù)可以去除會(huì )阻塞曾吸住的脂類(lèi)和小顆粒物質(zhì)。對于某些樣品,緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進(jìn)一步的預處理步驟,經(jīng)常用于濃縮腹水中的免疫球蛋白。
一、抗血清
多克隆抗體有時(shí)不經(jīng)純化的,稱(chēng)為血清和抗血清??寡迨侵敢呀?jīng)除去了凝血蛋白和血紅細胞的免疫宿主的血液??寡灏蟹N類(lèi)的抗體、免疫球蛋白以及其他血清蛋白。它所包含的不僅有識別靶抗原的抗體,還有識別非靶抗原的抗體,在免疫分析中有時(shí)會(huì )發(fā)生非特異性反應。由于這個(gè)原因,粗制抗血清通常要進(jìn)行純化,以去除血清蛋白,增加能特異和靶抗原相結合的免疫球蛋白的比列。
二、組織培養上清
單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細胞培養(細胞分泌性抗體)并收獲雜交瘤組織上的培養上清來(lái)獲得。
三、腹水
單克隆抗體可以通過(guò)在小鼠的腹腔中生長(cháng)雜交瘤細胞而產(chǎn)生。雜交瘤細胞注射入小鼠后,就會(huì )在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體(腹水),這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體,比雜交瘤細胞培養有更高的抗體量。
四、抗體純化
多克隆抗血清或單克隆腹水、組織培養上清通常通過(guò)以下三種方法的一種來(lái)進(jìn)行純化。
1、蛋白A/G純化
蛋白A/G純化是應用金黃色葡萄球菌的蛋白A或鏈球菌的蛋白G對免疫球蛋白Fc段的高親和性。蛋白A/G純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白,但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋組分。結果蛋白A/G純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應性。
2、親和純化
親和純化是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基之間的一種可逆的相互作用??乖H和純化是利用免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生抗原進(jìn)行結合的特點(diǎn),消除了大量的非特異免疫球蛋白成分,把與目標抗原特異結合的免疫球蛋白富集。因此親和純化后獲得的主要是含目標特異性免疫球蛋白。
3、前吸收
多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)前吸收,也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸收,以消除可能的交叉反應的抗體。這樣純化后的抗體春都和特異性都很高,任何交叉反應都被顯著(zhù)減少。