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Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan（參考圖1）。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關(guān)系。

圖1. WST-8檢測原理圖 （EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑）
WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類(lèi)似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線(xiàn)粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來(lái)溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩定，使實(shí)驗結果更加穩定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高。
WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩定。
本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長(cháng)抑制檢測。
本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作。無(wú)須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan?？梢杂糜诖笈繕悠返臋z測。
酚紅和血清對本試劑盒的測定無(wú)明顯影響。
WST-8對細胞無(wú)明顯毒性。加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復用酶標儀讀板，使檢測時(shí)間更加靈活，便于找到*測定時(shí)間。
本試劑盒可以測定500個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
注意事項：
由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，一定要注意蒸發(fā)的問(wèn)題。一方面，由于96孔板周?chē)蝗ui容易蒸發(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加PBS，水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本試劑盒的檢測依賴(lài)于脫氫酶催化的反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì )干擾檢測，需設法去除。
用酶標儀檢測前需確保每個(gè)孔內沒(méi)有氣泡，否則會(huì )干擾測定。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1. 通常細胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個(gè)細胞，細胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000個(gè)細胞（具體每
孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定）。按照實(shí)驗需要，進(jìn)行培養
并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以
此類(lèi)推?？梢杂眉恿讼鄳考毎囵B液和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用
的藥物會(huì )干擾檢測，需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細胞的孔作為空白對
照。
3. 在細胞培養箱內繼續孵育0.5-4小時(shí)，對于大多數情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(cháng)短根據細胞的類(lèi)
型和細胞的密度等實(shí)驗情況而定，初次實(shí)驗時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標儀檢測，然后選取
吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續實(shí)驗。
4. 在450nm測定吸光度。如無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片?？梢允褂么笥?00nm的波長(cháng)，例
如650nm，作為參考波長(cháng)進(jìn)行雙波長(cháng)測定。