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Thermo Pierce™ 細胞表面蛋白分離試劑盒

Thermo Scientific 細胞表面蛋白分離試劑盒是一整套試劑，用于對哺乳動(dòng)物細胞蛋白進(jìn)行選擇性生wu素化，并隨后進(jìn)行純化，以排除細胞內蛋白。

細胞表面蛋白分離試劑盒的特點(diǎn)：

•分離細胞表面蛋白—降低總細胞蛋白復雜性
•高效回收標記蛋白—通過(guò)可裂解生wu素，可幾乎回收分離的細胞表面蛋白
•便利—一個(gè)試劑盒中提供了所有試劑以及細胞表面膜蛋白標記、細胞裂解和純化的完整說(shuō)明
•Western 印跡應用—在 SDS-PAGE 緩沖液中回收的蛋白可直接上樣至聚丙烯酰胺凝膠
•穩健的系統—方案設計用于多種細胞系，包括 NIH 3T3、HeLa、C6 和 A431

該試劑盒可高效標記具有可獲取賴(lài)氨酸殘基和充分細胞外暴露的蛋白。分離程序使用不可透過(guò)細胞的可裂解生wu素化試劑（Sulfo-NHS-SS-生wu素）來(lái)標記完整貼壁或懸浮細胞表面的蛋白上暴露的伯胺。之后收獲并水解經(jīng)處理的細胞，并使用 Thermo Scientific NeutrAvidin 瓊脂糖樹(shù)脂對標記的表面蛋白進(jìn)行親和純化。分離出的細胞表面蛋白含一個(gè)原來(lái)標記伯胺、但不再生wu素化（生wu素保持連結至樹(shù)脂）的小型、非反應標記。該試劑盒含足以進(jìn)行八次實(shí)驗的試劑，每次實(shí)驗涉及裝有融合細胞的四個(gè) T75 瓶。

細胞表面蛋白分離試劑盒已成功用于標記和純化細胞表面蛋白。在一次實(shí)驗中，使用或不使用 Sulfo-NHS-SS-生wu素處理 HeLa 細胞，并根據試劑盒程序對細胞進(jìn)行處理。通過(guò) Western 印跡分析收集的組分，包括洗脫、流過(guò)物和洗脫后凝膠。在用生wu素標記處理的細胞的洗脫組分中鑒定出四種細胞表面蛋白。這些蛋白包括表皮生長(cháng)因子受體 (EGFR)、胰島素樣生長(cháng)因子-1 受體 β IGF (IGF-1β)、整合素 1 和整合素 5。與之形成鮮明對比的是，在未標記細胞的洗脫組分中未鑒定出這些蛋白；未標記蛋白僅在流過(guò)物中發(fā)現。此外，還在來(lái)自標記細胞的流過(guò)物組分中鑒定出一些細胞表面蛋白。由于空間位阻，這些蛋白很可能未被標記。洗脫后凝膠組分中存在的已捕獲蛋白量可忽略不計，表明已捕獲蛋白回收率將近 。在所有檢測樣品的洗脫組分中檢測到了痕量熱休克蛋白 90 (Hsp90)，表明細胞表面與細胞內蛋白標記具有特異性。

Thermo Pierce™ 細胞表面蛋白分離試劑盒