RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒 分子生物試劑
RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒
原理
細胞和易裂解組織首先在含有異硫*酸胍的高變性Buffer RLT Plus中裂解和勻質(zhì)化,該緩沖液能使RNases立即失活,以保證分離到完整的RNA。裂解液再流過(guò)gDNA Eliminator柱。該離心柱與高鹽緩沖液共同作用,可選擇性高效的去除基因組DNA。加入乙醇以提供RNA結合的合適條件,樣本再加入到RNeasy Mini離心柱。含有硅膠膜的特制離心柱能特異性的結合裂解細胞中的RNA。
RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen試劑盒
操作流程
可從多達107個(gè)細胞或30 mg組織中純化總RNA。簡(jiǎn)潔的工作流程可在25分鐘內純化得到已去除基因組DNA的RNA(參見(jiàn)RNeasy Plus procedure )。樣本首先被裂解和勻質(zhì)化。裂解液流過(guò)gDNA Eliminator柱,在流過(guò)gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,樣本再加上樣到RNeasy Mini離心柱。RNA結合到膜上,污染物被洗去。獲得高品質(zhì)RNA,洗脫體積30 ?l或更大。
處理不同的起始樣本可用不同的實(shí)驗方案。實(shí)驗方案的不同之處主要在于樣本的裂解和勻質(zhì)化。樣本上樣到gDNA Eliminator柱之后的步驟就類(lèi)似。此操作流程適合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可從培養細胞中純化含miRNA等小RNAs的總RNA。
使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)進(jìn)行組織破碎和勻質(zhì)化時(shí),可能會(huì )產(chǎn)生過(guò)多泡沫。在破碎和勻漿前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(單獨提供)可充分減少泡沫產(chǎn)生。Reagent DX經(jīng)仔細檢測,表明配合此試劑盒使用不會(huì )影響RNA的純度或下游應用。