www.1565333.com-日韩高清在线中文字带字幕,娇妻系列交换(纯肉高H),女教师の爆乳BD在线观看,三上悠亚SSⅠN939无码播放

您好,歡迎進(jìn)入上海力敏實(shí)業(yè)有限公司網(wǎng)站!
一鍵分享網(wǎng)站到:
您現在的位置:首頁(yè) >> 產(chǎn)品中心 >> 生化試劑、抗體、血清 >> 試劑盒 >> 150343凱杰試劑盒REPLI-g Single Cell Kit (24) 分子生物試劑

凱杰試劑盒REPLI-g Single Cell Kit (24) 分子生物試劑

  • 更新時(shí)間:  2023-07-27
  • 產(chǎn)品型號:  150343
  • 簡(jiǎn)單描述
  • 凱杰試劑盒REPLI-g Single Cell Kit (24)
    應用 儀器
    全基因組測序二代測序平臺?
    外顯子組測序
    SNP基因分型芯片芯片平臺?
    Array CGH
    qPCR/PCR技術(shù)Real-time PCR/PCR儀?
    Sanger測序毛細管測序儀?
    焦磷酸測序PyroMark (QIAGEN)
詳細介紹

凱杰試劑盒REPLI-g Single Cell Kit (24)

Performance


覆蓋基因組所有位點(diǎn),十分適用于二代測序和其他下游應用

REPLI-g Single Cell Kit擴增的DNA平均長(cháng)度大于10 kb,并且覆蓋所有基因組位點(diǎn)。該產(chǎn)品已經(jīng)過(guò)驗證,適用于二代測序、基于芯片技術(shù)的比較基因組雜交(aCGH)和real-time PCR應用等多種下游分析。使用該產(chǎn)品無(wú)需單獨進(jìn)行PCR擴增,減少了手動(dòng)操作,獲得的產(chǎn)物長(cháng)度PCR方法更長(cháng)(參見(jiàn)"Next-generation sequencing using REPLI-g amplified DNA requires less hands-on time and generates more sequence information than PCR-based methods")。用擴增產(chǎn)物進(jìn)行二代測序,獲得高品質(zhì)結果。這表明該試劑盒的位點(diǎn)覆蓋率大,錯配率低,其擴增的DNA(甚至從單一細菌細胞中擴增的DNA)能夠與純化獲得的基因組DNA相媲美(參見(jiàn)"Comparable NGS results")。另有研究對人類(lèi)常染色體和X染色體上的多個(gè)標記物進(jìn)行了分析,三個(gè)獨立的實(shí)驗均顯示:基因組的所有位點(diǎn)被成功擴增,沒(méi)有遺漏任何一個(gè)位點(diǎn)(參見(jiàn)"Complete genome coverage")。

REPLI-g Single Cell Kit的表現優(yōu)于其他供應商的試劑盒

其他供應商的試劑盒基于PCR技術(shù)進(jìn)行全基因組擴增,獲得的產(chǎn)物片段較短,帶有PCR引物序列,可能影響下游應用?;赑CR的全基因組擴增容易出現錯誤,會(huì )導致堿基對突變、STR的減少或增多,使用低保真Taq DNA聚合酶會(huì )導致位點(diǎn)缺失。相反,REPLI-g Single Cell Kit能夠進(jìn)行高度均一的全基因組擴增,位點(diǎn)偏差小。對四個(gè)試劑盒進(jìn)行了檢測,其中兩個(gè)利用多重置換擴增技術(shù)(包括REPLI-g Single Cell Kit),另外兩個(gè)利用PCR技術(shù)。采用單一細胞擴增實(shí)驗方案對所有試劑盒進(jìn)行序列位點(diǎn)檢測。除REPLI-g Single Cell Kit外的其他供應商的試劑盒都出現了位點(diǎn)的遺漏(參見(jiàn)"Unbiased DNA amplification from a single cell")。


凱杰試劑盒REPLI-g Single Cell Kit (24)

Principle


REPLI-g Single Cell Kit含有REPLI-g sc Polymerase,這是一種優(yōu)化的新型高保真Phi 29聚合酶。該試劑盒采用多重置換擴增技術(shù)擴增復雜的基因組DNA,溫和的堿孵育能夠避免DNA片段化,促進(jìn)對所有位點(diǎn)的無(wú)偏差擴增。該試劑盒十分適用于分離的腫瘤細胞或細菌細胞等單一細胞,能夠擴增獲得高產(chǎn)量DNA(參見(jiàn)表1)。此外,該試劑盒還配有專(zhuān)用于鮮血或干血、新鮮或冷凍組織的實(shí)驗方案,可用于多種研究樣本。常規DNA產(chǎn)量可達40 µg,對模板的起始量要求低,因此進(jìn)行后續遺傳分析時(shí)無(wú)需檢測DNA濃度。REPLI-g Single Cell Kit的擴增產(chǎn)物平均長(cháng)度超過(guò)10 kb,且覆蓋所有位點(diǎn),適合于多種應用,包括二代測序、基于芯片技術(shù)的比較基因組雜交、焦磷酸測序和real-time PCR分析(參見(jiàn)表2)。

表2. 下游應用和儀器
應用儀器
全基因組測序二代測序平臺?
外顯子組測序
SNP基因分型芯片芯片平臺?
Array CGH
qPCR/PCR技術(shù)Real-time PCR/PCR儀?
Sanger測序毛細管測序儀?
焦磷酸測序PyroMark (QIAGEN)
? 多家供應商均有銷(xiāo)售

擴增原理

REPLI-g Single Cell Kit采用等溫基因組擴增技術(shù),即多重置換擴增(MDA)。六聚體與變性DNA隨機結合,然后在等溫條件下,在優(yōu)化的Phi 29聚合酶作用下,發(fā)生鏈置換合成反應。每個(gè)置換后的單鏈作為模板,與引物結合,可擴增獲得高產(chǎn)量DNA(參見(jiàn)"Multiple Displacement Amplification (MDA) technology")。Phi 29聚合酶為噬菌體衍生酶,具有3'→5'引物外切酶活性(校正活性),其保真性是Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi 29聚合酶在優(yōu)化的REPLI-g Single Cell緩沖液體系中,能夠輕松的打開(kāi)發(fā)卡結構等二級結構,因此可促進(jìn)擴增時(shí)聚合酶正常工作??蓴U增獲得長(cháng)達100 kb的DNA片段(參見(jiàn)"Unbiased amplification with Phi 29 polymerase")。

細胞裂解和DNA的堿變性 

基因組DNA在用于酶促擴增反應前必須經(jīng)過(guò)變性,而這一變性過(guò)程通常使用高溫或高pH值(強堿)孵育。REPLI-g Single Cell Kit采用溫和的堿孵育,在細胞裂解、DNA變性的同時(shí),確保DNA片段化程度小,不產(chǎn)生堿基突變。因此擴增獲得的DNA完整度高,產(chǎn)物長(cháng)度長(cháng),覆蓋位點(diǎn)多(參見(jiàn)"Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation")。

高效去除可檢測到的DNA污染

REPLI-g Single Cell Kit中的所有組分都經(jīng)過(guò)了dute的去污染流程,避免擴增產(chǎn)物被污染。在標準化流程中,對緩沖液和試劑進(jìn)行紫外線(xiàn)照射,確保其不會(huì )污染DNA(參見(jiàn)"Innovative decontamination procedure")。紫外線(xiàn)照射后,對試劑盒的所有組分進(jìn)行嚴格的質(zhì)量控制,確保其性能。

Procedure


簡(jiǎn)單的單管操作

REPLI-g Single Cell Kit可對單一細胞或有限的樣本進(jìn)行簡(jiǎn)便、可靠、準確的全基因組擴增。反應體系構建十分便利、可靠,僅需15分鐘左右的手動(dòng)操作(參見(jiàn)"REPLI-g Single Cell Kit procedure")。專(zhuān)用的緩沖液和試劑可對單一細胞、有限的組織材料、或純化的DNA進(jìn)行擴增,產(chǎn)量高、位點(diǎn)覆蓋率大(參見(jiàn)表3)。REPLI-g技術(shù)擴增獲得的DNA可在–20°C長(cháng)期儲存(參見(jiàn)"Consistent long-term stability")。請參見(jiàn)表4,了解REPLI-g產(chǎn)品線(xiàn)的更多信息。

表3. REPLI-g Single Cell Kit的成分
試劑盒成分優(yōu)勢
REPLI-g sc Polymerase最長(cháng)可達70 kb的長(cháng)片段
保真性是Taq聚合酶的1000倍
覆蓋所有位點(diǎn)
均一擴增所有位點(diǎn)
REPLI-g sc Reaction Buffer?對所有位點(diǎn)進(jìn)行無(wú)偏差的擴增
Buffer DLB (裂解和變性)高效擴增
不損傷DNA
紫外線(xiàn)照射去除污染減少可檢測到的殘留DNA污染
? 含有鹽、引物和dNTP
表 4. 多種REPLI-g Kits的規格

REPLI-g Single CellREPLI-g MiniREPLI-g UltraFast MiniREPLI-g MidiREPLI-g ScreeningREPLI-g FFPEREPLI-g Mitochondrial DNA
起始材料單一細胞、gDNA純化的基因組DNA、血液、細胞純化的基因組DNA、血液、細胞FFPE組織、FFPE組織中純化的基因組DNA純化的基因組DNA
另外提供其他起始材料的實(shí)驗方案
起始量單一細胞、2–1000各細胞、組織、純化的gDNA (1–10 ng)>10 ng gDNA、0.5 µl血液或細胞(>600個(gè)細胞/µl)>10 ng gDNA、0.5 µl血液或細胞(>600個(gè)細胞/µl)組織切片(直徑1 cm,厚度10–40 µm);>100 ng gDNA>1 ng純化的gDNA
產(chǎn)量(µg/反應)40107–10408標準產(chǎn)量:≤10; 高產(chǎn)量:≤403–5
反應時(shí)間8–16小時(shí)10–16 小時(shí)1.5小時(shí)8–16小時(shí)12–16小時(shí)標準產(chǎn)量:4小時(shí);高產(chǎn)量:10小時(shí)8小時(shí)
手動(dòng)操作時(shí)間15分鐘15分鐘15分鐘15分鐘15分鐘40分鐘15分鐘
規格反應管反應管反應管反應管孔板

Applications


使用REPLI-g Single Cell Kit擴增獲得的DNA可用于多種下游應用,包括:
  • 二代測序

  • 采用TaqMan引物/探針對進(jìn)行的SNP基因分型

  • 基于qPCR和PCR的突變檢測

  • STR/微衛星分析

  • Sanger測序

  • 焦磷酸測序

  • aCGH等芯片技術(shù)





留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話(huà):

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說(shuō)明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫(xiě)阿拉伯數字),如:三加四=7
正镶白旗| 西乌珠穆沁旗| 曲靖市| 托克逊县| 泉州市| 横峰县| 彰化县| 泰和县| 平安县| 霍山县| 十堰市| 秦皇岛市| 安龙县| 青龙| 酉阳| 南郑县| 崇信县| 遵义市| 吐鲁番市| 湟中县| 内黄县| 时尚| 康定县| 长垣县| 乌鲁木齐市| 深水埗区| 江津市| 江山市| 石泉县| 长子县| 闽侯县| 楚雄市| 馆陶县| 天镇县| 大化| 湖北省| 边坝县| 清徐县| 罗田县| 南投市| 外汇|