凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物試劑
凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
純化得到至多500 μg無(wú)內毒素高轉染級純質(zhì)?；蚩滤官|(zhì)粒DNA
純化得到的DNA內毒素低于0.1 EU/µg
純化流程快，同時(shí)去除內毒素
獲得高產(chǎn)量的高拷貝質(zhì)粒DNA
使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過(guò)過(guò)濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過(guò)兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉染級純的應用。
質(zhì)粒純化方法與轉染效率。
使用兩種方法獨立制備pRSVcat，分別使用脂質(zhì)體介導的方法轉染到COS-7、HeLa和LMH細胞中，及使用磷酸鈣轉染至Huh7細胞中。平均轉染效率以相對于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉染效率表示。
凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過(guò)程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過(guò)QIAfilter Maxi Cartridge過(guò)濾細菌裂解液，通過(guò)重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。100–250 ml培養菌液至多可純化500 µg DNA。（培養量取決于質(zhì)?？截悢盗?、插入片段大小、宿主菌和培養介質(zhì)。）純化的DNA無(wú)內毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過(guò)程中釋放的內毒素，內毒素會(huì )影響原代細胞和敏感培養細胞的DNA轉染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無(wú)內毒素DNA高度適用于可重復且結果可靠的轉染。QIAGEN超純無(wú)內毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。
| 質(zhì)粒準備方法 | 內毒素(EU?/µg DNA) | 平均轉染效率? |
|---|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
| QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100 |
| 2x CsCl | 2.6 | 99% |
| Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
| DNA純化方法 | 轉染細胞百分比 |
|---|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
| QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
| Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
純化的質(zhì)粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。
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