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GE Percoll細胞分離液17-0891-01

  • 更新時(shí)間:  2023-07-25
  • 產(chǎn)品型號:  17-0891-01
  • 簡(jiǎn)單描述
  • GE Percoll細胞分離液17-0891-01
    Percoll為低粘度的密度梯度介質(zhì),用于分離細胞、亞細胞結構和較大的病毒分子。粘度低,因此使用低的離心力(200-1000× g),只需幾分鐘就可形成梯度對細胞進(jìn)行分離。Percoll供貨時(shí)已經(jīng)消毒,并且易于再次消毒。包裝于易打開(kāi),并可再次密封的250ml和1升瓶中。
詳細介紹

GE Percoll細胞分離液17-0891-01

1、在溫和的條件下,分離細胞、亞細胞結構和較大的病毒分子(可小至~70S),保持其存活和形態(tài)的完整性

2、對細胞無(wú)毒性

3、可調整到生理狀態(tài)下的離子強度和pH

4、使用角轉頭,以中速離心,即可形成梯度

5、等滲梯度,密度zui大可達到1.3 g/ml。

GE Percoll細胞分離液17-0891-01

操作方法及注意事項
  1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
 Percoll濃度(%)  70    60    50    40    30     20
  比重g/ml    1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.不連續密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩沿管壁流下,使形成滿(mǎn)意的界面。在制備過(guò)程中一般用長(cháng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí),可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3.裝樣:樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過(guò)大,細胞濃度也不可過(guò)高,否則會(huì )影響細胞的分離和回收。
4.離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時(shí)要慢,要平穩。
5.取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時(shí)大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養或檢測用。


分離純化細胞舉例
  1.富含NK活性大顆粒淋巴細胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五種不同密度的Percoll,如用10ml試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2~1.5ml,初步從外周血中分離的PBMC細胞1×108懸于1ml培基中,按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細胞位于42.5%與45%Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
2.純化淋巴母細胞和除去死細胞:分別疊加50%和30%Percoll液。收取經(jīng)PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者),按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞;兩層Percoll之間為淋巴母細胞,純度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進(jìn)行表型、結構以及功能的研究。



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