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TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

KOD DNA polymerase具有強力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可準確地對目的片段進(jìn)行擴增，作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評。然而，高保真性PCR酶在20?30循環(huán)以后，容易出現擴增無(wú)法持續的<停滯現象>。KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶：KOD -Plus-系列技術(shù)的基礎上，應用了本公司新開(kāi)發(fā)的「延伸增強劑」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（約為T(mén)aq的80倍）的同時(shí)，通過(guò)抑制<停滯現象>，明顯提高了對微量模板DNA、長(cháng)目的片段的擴增效率。

TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

特征：

特征1.　可對微量模板DNA進(jìn)行高保真?高效率的擴增
通過(guò)應用延伸增強劑技術(shù)，即便是微量模板DNA也可對目的基因進(jìn)行高保真?高效率的擴增。同時(shí)本酶具備高保真性（約為T(mén)aq的80倍），可準確地對低拷貝數模板的目的基因進(jìn)行擴增。
此外，由于使用抗體的熱啟動(dòng)法，因此可進(jìn)行特異性良好的擴增。

特征2.　縮短了延伸時(shí)間<30sec./kb>　（長(cháng)目的片段更方便）
延伸時(shí)間從原產(chǎn)品的60sec./kb縮短到30sec./1kb。對長(cháng)目的片段的擴增更加方便。

特征3.　實(shí)現了各種引物同一循環(huán)條件
通過(guò)對反應Buffer組成的zui適化，與原來(lái)的KOD DNA polymerase相比，延伸性?擴增效率有了大幅的提升。
實(shí)現了無(wú)需探討循環(huán)條件。20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。無(wú)需探討非常簡(jiǎn)便。
*Tm值采用zui鄰近法(Nearest Neighbor method)計算得到的值。

特征4.　長(cháng)目的片段的擴增
提高了延伸性，可對各種長(cháng)度的目的片段進(jìn)行擴增。已通過(guò)實(shí)驗確認可對24kb的基因組DNA 進(jìn)行擴增。

實(shí)驗例

實(shí)驗例1. 對來(lái)自Total RNA的各種基因全長(cháng)ORF的擴增
實(shí)驗例2. 微量Template的擴增
實(shí)驗例3. 各種長(cháng)度目的片段的擴增效率?延伸性的比較

簡(jiǎn)要備注

＜幾點(diǎn)建議＞
●PCR產(chǎn)物的克隆
由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，可用平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。此時(shí)，如已對載體進(jìn)行了脫磷酸化處理，就需要對PCR產(chǎn)物進(jìn)行磷酸化，或使用帶5'磷酸基的引物?！×硗?，由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，不能直接進(jìn)行TA克隆?？墒褂冒匆韵路椒ㄩ_(kāi)發(fā)的TA克隆試劑盒「TArget Clone -Plus-」。

*包含于TArget Clone -Plus-(Code No. TAK-201)中。
**推薦使用Ligation high Ver.2 (Code No. LGK-201)。
 

＜注意＞
●引物的設計
3'端有錯配的引物，可能會(huì )受本酶校正。

簡(jiǎn)要備注① 關(guān)于Polymerase
應用于PCR的DNA polymerase大致可分為2大類(lèi)。一類(lèi)是從嗜熱菌中分離出來(lái)的被稱(chēng)為polⅠ型的聚合酶，以Taq、Tth　DNA polymerase為代表。另一類(lèi)是從超嗜熱Archaea中分離出來(lái)的被稱(chēng)為α型的聚合酶，KOD、Pfu DNA polymerase屬于該類(lèi)。α型酶具有polⅠ型酶所沒(méi)有的3'→5核酸外切酶活性。該活性被稱(chēng)為Proof-reading（校正）活性，與PCR的保真性有著(zhù)非常深厚的淵源。KOD DNA polymerase利用該Proof-reading活性，表現出很高的保真性。但具備該活性的酶一般被認為對PCR反應效率有不好的影響。KOD -Plus- Neo通過(guò)應用新的延伸增強劑、熱啟動(dòng)法、以及Buffer組分的改良，大大提高了PCR效率。

Memo②　什么是熱啟動(dòng)？
在室溫條件下配制PCR反應溶液時(shí)，配制過(guò)程中聚合酶會(huì )開(kāi)始反應。在室溫下由于引物的特異性降低，很容易產(chǎn)生非特異性反應等副反應。另外，KOD DNA polymerase具有很強的3'→5'核酸外切酶活性(Proof reading活性)，這也是產(chǎn)生副反應的原因之一。熱啟動(dòng)法是指在高溫階段，激活聚合酶活性的方法，迄今為止已有好多種方法。其中zui嚴格的是使用中和抗體的方法。
KOD -Plus- Neo中由于混合了兩種抗Taq DNA polymerase抗體，在常溫狀態(tài)下可*抑制聚合酶的活性及校正活性。而該抑制作用在PCR的預變性階段*失活，對PCR沒(méi)有任何影響。

訂購信息：

20U（20次用） 貨號：KOD-401S

200U（200次用）  貨號：KOD-401

200U*5支（1000次用） 貨號：KOD-401B

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