MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光時(shí)間長(cháng)可反復曝光
瀏覽次數：3903發(fā)布日期：2017-09-20
MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物是指在化學(xué)發(fā)光反應中參與能量轉移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。在發(fā)光免疫技術(shù)中常用的化學(xué)發(fā)光底物有以下幾類(lèi)。
1．氨基苯二酰肼類(lèi)主要是魯米諾及異魯米諾衍生物，是zui常用的一類(lèi)化學(xué)發(fā)光劑。魯米諾（luminol，5'-氨基-2，3-二氫-1，4-酞嗪二酮）的分子結構及化學(xué)反應式如下：
魯米諾反應結構式
魯米諾在免疫測定中既可用作標記物，也可用作過(guò)氧化物酶的底物。異魯米諾衍生物ASEI和ABMI等也是常用的標記物。
2．吖啶酯（acridiniumester，AE）類(lèi)類(lèi)發(fā)光劑不需催化劑的存在，在有過(guò)氧化氫的稀堿溶液中即能發(fā)光。反應式如下：
電化學(xué)發(fā)光原理
上式反應迅速，在1～5s內即可完成；具有背景低、信比高的優(yōu)點(diǎn)，其檢測極限可達5×10-9mol，發(fā)光量與AE濃度呈良好的線(xiàn)性反應，是一類(lèi)的標記物。
3．電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL）反應在電極表面進(jìn)行。發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)32+]，另一反應物為三丙胺（TPA）。在陽(yáng)電極表面，以上兩化學(xué)物質(zhì)可同時(shí)失去電子發(fā)生氧化反應（圖2）。二價(jià)的Ru(bpy)32+被氧化成三價(jià)Ru(bpy)33+，TPA被氧化成陽(yáng)離子自由基TPA+●，后者失去一個(gè)質(zhì)子（H+），成為自由基TPA●，這是一個(gè)強還原劑，可將一個(gè)電子遞給三價(jià)的Ru(bpy)32+*，而TPA自身被氧化成TPA氧化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)32+*在衰減時(shí)發(fā)射一個(gè)波長(cháng)為620nm的光子，重新生成基態(tài)的Ru(bpy)32+。這一過(guò)程在電極表面周而復始地進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，使信號得以增強。
4．MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物產(chǎn)品特點(diǎn)
靈敏：信號強背景低，所需抗原抗體量少。
持久：發(fā)光時(shí)間長(cháng)，可進(jìn)行反復曝光，進(jìn)行結果優(yōu)化，而不需要重復Blot。
快捷：MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物操作簡(jiǎn)單方便，且數秒內即可產(chǎn)生強烈信號。
定量：使用反射型顯像密度計或者CCD相機掃描已曝光的X光片，可對目的蛋白進(jìn)行定量。
穩定：產(chǎn)品有效期長(cháng)，4℃可保存1年；且曝光后X光片上的印跡不褪色，可使實(shí)驗結果長(cháng)期保存。
