血清/血漿核酸純化試劑盒QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit
qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit
從人類(lèi)血漿或血清中濃縮和純化游離DNA和RNA
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit大大簡(jiǎn)化了從血漿或血清中濃縮和純化游離DNA和RNA的過(guò)程。
qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit
回收游離DNA。
在24個(gè)血漿樣本中加入同等量的DNA片段(200 bp和1000 bp)。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化DNA,洗脫體積為80 μl。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit對每個(gè)DNA片段特異性的66 bp靶點(diǎn)進(jìn)行雙重real-time PCR,定量DNA的產(chǎn)量。
回收片段化DNA,表現更出色。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化游離DNA,或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit從200 μl血漿中純化游離DNA,洗脫體積為100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit對18S rRNA基因內的66 bp擴增片段和500 bp擴增片段進(jìn)行雙重real-time PCR,定量DNA的產(chǎn)量。500 bp擴增片段和66 bp擴增片段的擴增差異顯示DNA被片段化,從而導致完整的500 bp目標序列的豐度低于較短的66 bp靶點(diǎn)。(請注意差異大于五倍樣本輸入體積差異)。
高效純化游離miRNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml采集血漿中純化游離DNA,洗脫體積為50 μl。將標準試劑盒實(shí)驗方案與適用于miRNA的實(shí)驗方案進(jìn)行比較。使用TaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)定量miRNA 30b的產(chǎn)量,使用Human miScript Assay(QIAGEN)定量miRNA 16的產(chǎn)量。采用miRNA實(shí)驗方案獲得的CT值較低,表示miRNA的產(chǎn)量更高。
高效回收甲基化DNA。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml血漿中純化加入的甲基化DNA和非目標poly-A RNA,洗脫體積為45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit(QIAGEN)進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉化,使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit組分在A(yíng)BI PRISM 7900HT Sequence Detection System上進(jìn)行甲基化特異性PCR(MSP)。對兩個(gè)全甲基化位點(diǎn)數據進(jìn)行分析。
qiagen
erformance
分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段和mRNA可對普通血液樣品進(jìn)行特異性地腫瘤類(lèi)型檢測。這些存在于血清或血漿中的游離核酸通常都是<1000 bp(DNA)或<1000 nt(RNA)的片段。此外,小至21 nt的miRNAs可作為某些癌癥和疾病狀態(tài)的生物標記。
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可從人類(lèi)血漿、血清和其他無(wú)細胞體液中高效純化游離核酸。純化效率高、重現性好、產(chǎn)量高(參見(jiàn)"Reproducible recovery of circulating DNA")。應用延長(cháng)的上樣管和真空裝置QIAvac 24 Plus可將樣品處理量提至5 ml,洗脫體積可在20–150 μl之間靈活變化,可濃縮低濃度核酸。 該試劑盒采用先進(jìn)的技術(shù),硅膠膜選擇性的結合目標核酸,提高片段化核酸的回收率(參見(jiàn)"Improved recovery of fragmented DNA")。
使用RNase-Free DNase Set進(jìn)行DNA柱上消化,純化獲得不含DNA的游離RNA 。特別設計的流程確保高效純化諸如miRNA等小RNA(參見(jiàn)"Efficient purification of circulating miRNA")。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效純化甲基化DNA,經(jīng)純化的DNA維持其甲基化狀態(tài),可進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉化實(shí)驗,進(jìn)行甲基化狀態(tài)分析(參見(jiàn)"Efficient recovery of methylated DNA")。
經(jīng)純化和濃縮的游離DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì),可即用于各種下游應用,包括:
PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR
用于基于血液樣品的癌癥生物標記的研究、驗證和檢測
病毒核酸檢測